当前世界环境

介绍

微生物通过食物和环境进入鱼类的消化系统，当然并不是所有食物中的细菌都进入鱼类的消化道。¹它们在鱼类消化道微生物的形成中起着重要的作用。²鱼的消化道营养丰富，为参与宿主消化过程、生长和疾病的大多数细菌的生长提供了有利的条件。^3.动物肠道菌群组成可因年龄、营养状况、发育阶段和应激而改变。这些变化会引起宿主动物的疾病或产生有益的影响。⁴因此，可以通过观察肠道菌群的组成来评估鱼类对疾病的敏感性。一些能够耐受胃液pH值较低的细菌，能够抵抗胆汁酸、肠道分泌的溶菌酶、免疫反应，粘附在黏液或肠壁表面，并能持续较长时间，最终使肠道菌群成为每个宿主动物特有的。⁵很明显，肠道中的细菌种类会影响宿主的健康和生长。

在海洋和其他水生动物中，消化系统中微生物的定植受许多宿主和非宿主相关因素的影响。另一方面，从海洋鱼类的肠道中分离出产生抗菌物质的细菌^5、6、7由此提示，这些细菌可能抑制了入侵细菌在鱼肠内的建立。一般来说，由于细菌的降解，鱼类很快就会腐坏，不适合食用。在细菌中,假单胞菌Sp.可能通过在鱼组织中产生组胺而导致腐败。⁸肠道细菌在鸟类和哺乳动物中的重要性已经得到证实。然而，关于碎屑鱼肠道细菌负荷的信息有限。因此，本研究对红树林环境中碎屑鱼类的THB负荷进行了研究。

材料和方法

Pichavaram红树林位于(11^o27日’;79^o距离金奈市近250公里，距离东部的奇丹巴拉姆镇15公里。它是印度典型的红树林之一，有机碎屑年产量高达8吨/公顷。它由52个大大小小的小岛组成，占地1100公顷。在总面积中，50%为森林覆盖，40%为水覆盖，其余10%为沙和泥滩。生活区受孟加拉湾浅水、Coleroon和Vellar河口半咸水和Khan Sahib运河淡水混合的影响。红树林种有13种，伴生种有76种。研究区最具优势的红树林植物种类包括根罗托拉和矮小．

碎屑鱼类,莉莎parsia(黄金鲻鱼),查诺斯查诺斯(牛奶鱼)和虾(印度白虾-Fenneropenaeus indicus虎虾-中国对虾学名:)于2014年12月从Pichavaram红树林水域采集，放在无菌塑料袋中，并保存在4ºC的冰盒中。采集的样本立即带回实验室进行肠道微花分析。

为了分析肠道微花种群，采用70%乙醇浸泡30秒进行表面消毒。用无菌剪刀将鱼腹部切开，无菌取1g的肠道内容物。用组织匀浆器(w -44468-19, Argos Technologies, China)加入1 ml 50%无菌海水，并转移到9 ml无菌空白溶液中。为了枚举来自鱼和对虾样品肠道的总异养细菌负荷。鱼和对虾的匀浆样品连续稀释至10^－５将每种稀释液0.1 ml (' L ' -棒法)涂布于含有动物组织消化性消化液(5)、酵母膏(1)、柠檬酸铁(0.1)、氯化钠(19.45)、氯化镁(8.8)、硫酸钠(3.24)、氯化钙(1.8)、氯化钾(0.55)、碳酸氢钠(0.16)、溴化钾(0.08)、氯化锶(0.034)、硼酸(0.022)、硅酸钠(0.004)、氟酸钠(0.0024)、硝酸铵(0.0016)、磷酸二钠(0.008)、琼脂(15)、pH(7.6±0.2)、蒸馏水。

将接种的板在37℃下孵育（Thermo Sciencific培养箱UE-3880000），使得板上开发的菌落被计数并表示为CFU / g鱼缸（菌落形成单元）。检查平板并计入每培养皿的菌落数。使用下式计算给定样品中的微生物载荷，并且其表示为每克均质样品的菌落形成单元（CFU）。

类似地，在去除甲壳后打开虾肠，并且根据用于鱼类样品采用的程序进行THB的枚举。为每个样品维持三次重复。孵育三至四天后，将在板上开发的细菌菌落进行计数，分离，纯化并保存在营养琼脂倾斜中，以进一步分析。基于Bergey描述的方案，纯化的菌株鉴定到属级别。⁹根据革兰氏染色和菌落形态特征即,将细菌的结构、表面、海拔高度、颜色、不透明度、形状、大小、边缘和菌落划分为不同类型，并统计每个可识别类型的菌落数量。然后通过对每种细菌类型的少数代表进行重复划线，获得纯培养物。

结果

研究了碎屑鱼的总异养细菌负荷。图1给出了鳍状鱼类的结果。乳鱼的异养细菌总数较高(查诺斯查诺斯) 2.24 x 10⁵CFU/g，其次为金鲻鱼(丽莎parsia) 1.90 x 10⁵CFU / g(图1)。虾的肠道细菌密度如图2所示。印度白虾(Fenneropenaeus indicus) 3.16 x 10⁵CFU/g比虎虾(中国对虾学名:) 1.88 x 10⁵CFU / g(图2)。

图1:鱼类肠道总异养细菌负荷 点击这里查看图

图2:对虾肠道总异养细菌负荷 点击这里查看图

通过各种试验，从鱼鳍类和贝类中分离出355株细菌，分为8个属。他们是弧菌(44)芽孢杆菌(51)假单胞菌(64),黄杆菌属(42),气单胞菌属(57)肠杆菌属(47)产碱杆菌属(21)和不动杆菌（29）（表1）。

表1:从红树林水域采集的鳍鱼和贝类中分离出的细菌菌株

讨论

与健康鱼类相关的细菌的数量和类型是非常自然和有趣的。然而，关于肠道菌群的信息通常是不完整的。本研究对红树林水域的鱼类和虾类碎屑进行了总异养细菌分析。一般来说，鱼类与环境有密切的联系，细菌通过环境沿着食物和水被摄入。

罗非鱼肠道细菌负荷较高，这可能与自然系统中许多中嗜菌在池塘水体的高环境温度接近最适温度有关。¹⁰鱼鳃和鱼肠中的高细菌载荷可能是由于与较高温度的增加的鱼类相关的鱼的高代谢活性。¹¹他们还报告说，池塘水和沉积物细菌影响了罗非鱼鳃和肠道的细菌组成。鱼消化道中的细菌数量取决于最近摄入的食物的数量和种类。¹²坂田et al .,^13，14据报道，获得的较低的计数更有可能代表附着在肠道上皮上或与肠道上皮密切相关的需氧细菌种群的大小的现实估计。在Mugil领着，发光菌群密度在后肠最大，前肠最小。在Tachysurus艾利乌，发光菌群密度最大的是后肠，最小的是中肠。¹⁵鲑鱼和罗非鱼的肠道菌群随发育而变化。^16、17麦克唐纳et al。¹⁸认为从幼鱼到成年鱼的细菌数量下降是一种未描述的现象，可能反映了随着动物年龄的增加，表面年龄的微妙差异。

一些因素，如细菌宿主的特异性，食物类型和水资源可以解释这些差异。¹⁹周围环境中的细菌和摄食习惯可能会影响鱼类胃肠道微生物群的组成。海洋鱼类肠道中最常见的细菌是不动杆菌，弧菌和假单胞菌。^{20日,21日,22}的弧菌被认为是主要的细菌之一。^{22日,23日,24日,25岁}然而，物种之间的分离物的数量显着变化。革兰氏阴性细菌气单胞菌属hydrophila，气单胞菌属veronii是最常分离的胃肠道区域。²⁶罗非鱼肠道菌群Oreochromis mossambicus碱性蛋白酶的优化和优化Virgibacillus pantothenticus是最近实施的。²⁷林格et al .,²⁸孤立的Psychrobacter从海鱼的内脏中提取，如北极炭鱼(Salvelinus alpinus)及大西洋鳕鱼(Gadus morhua)，²⁹但它在鱼类肠道中的作用尚不清楚。不同大小组罗非鱼的细菌负荷无显著差异。^30.

在本研究中菌株假单胞菌Sp.占主导地位，其次是the气单胞菌属在所有被研究的鱼的内脏中。乳鱼的THB负荷较高(图1)，其次是印度白虾，虎虾的THB负荷最低(图2)。目前的发现也证实了Sivasubramanian的发现et al。^30.这一假单胞菌物种在罗非鱼的肠道中占优势。芽孢杆菌已成功地从几种海鱼的肠道中分离并作为益生菌应用。^{第三十一条、第三十二条、第三十三}许多芽孢杆菌从海洋鱼中分离的菌株可以抑制潜在的病原体。^31日,33目前的研究表明，这些菌株可以有效地作为配制的鱼/虾饲料的补充或以细菌生物膜的形式来增强肠道定植。研究结果对开发商业水产养殖益生菌也有一定的指导意义。

承认

我们感谢Chidambaram政府艺术学院的校长提供了必要的设施，感谢K. Saravanakumar博士对手稿的帮助，感谢新德里大学教育委员会通过MRP项目提供的财政支持[environment -2013-37633]。

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