当前世界环境

介绍

黄金开采中汞的利用会产生含汞废物，造成环境污染。汞属于对生物有毒的重金属。水星会攻击中枢神经系统，导致记忆丧失、震颤和运动能力下降。已检测到导致胎儿死亡的中毒。日本的微小病就是汞中毒的例子。^1,2

汞作为一种环境污染物，需要引起重视和解决。汞的解毒可以通过沉淀法、混凝法、反渗透法、离子交换法和活性炭吸附法进行。^3,4然而，这个处理方法相对曝光问题，即该综合体内的生物的积累。⁴

汞解毒可以通过使用具有抗汞根抗汞细菌来完成，称为mer操纵子^，．^4，5有金矿在Waekerta村，街道Waeapo，马鲁古省，印度尼西亚，其中theprocessing ofgoldusingmercuryandthe wasteis放电intothe environmentwithout方面tothecontaminationoccurred（图1）。基于这种背景，有必要从金加工的沉淀物分离汞抗性细菌能够到含有500ppm的HgCl的NA培养基上生长₂并分析了HgCl的还原能力₂．

材料和方法

研究材料

本研究以Maluku Waekerta村黄金加工废物处置场的沉淀池为例。本研究使用的材料为营养琼脂（默克）、营养肉汤（默克）和HgCl₂．

研究工具

本研究使用的仪器有热板、高压釜、涡流、培养箱、试剂盒Microgen TM GnA + B-ID System、显微镜、分光光度计、CV-AAS和层流空气流柜。

取样

我们从韦克塔村的42个黄金加工厂采集了多达20%的样本，所以⁹位置选择获得沉积物样本。然后将5种不同点上的每个位置取样的样品混合成一个。挖掘土地的土地样品被用作比较，因此所有样品的总数都变成了沃斯卡斯塔斯村的采样场所。

细菌分离

抗汞细菌分离被传播板的方法来完成。⁶Sedimen和土壤样品按系列（10）稀释^-1, 10^-2和10.^-3)，用盐溶液(0.85% NaCl)。从10^-3稀释0、1 ml，涂布于含有10ppm HgCl的营养琼脂(NA)的培养皿中₂．然后孵化室温3天。生长的细菌分离物与不同的菌落形态特征将AGA重新分离成新的媒体，以获得纯文化并储存在琼脂倾斜中进行进一步测试。

汞阻力细菌选择

细菌的选择是建立在不同HgCl培养基中异分离菌生长能力的基础上的₂浓度。细菌分离物在含有25ppmof HgCl的NA培养基上生长₂并孵化室温24小时。如果分离芽孢杆菌，则通过用HGCL迪利的名称进行条纹方法重新种植Chese Bacteria Lisolates₂以50ppm、100ppm、250ppm、400ppm、500ppmin的较高浓度获得能够在最高HgCl中生存的优良菌株₂专注。纯化的分离物储存营养琼脂倾斜介质，温度为-20℃。

汞抗性细菌鉴定

耐汞细菌鉴定的观察参数为NA培养基上的菌落形态、革兰氏染色和特性生理学(生化试验)。生理特性使用Microgen™kitGNA+B-ID系统鉴定(Microgen Bioproduct, UK)进行测试。

最佳温度对汞耐药菌的生长判断

为确定菌株的最适生长温度，将菌株在营养肉汤培养基上培养，不同的温度分别为:25℃、30℃、37℃、45℃。培养物在此温度下培养24小时。在620 nm波长处用分光光度计测量分离株的浊度。在620nm波长下观察到细菌细胞的吸光度值，每次处理重复3次。

耐汞细菌生长最适pH值的确定

为了确定最适的生长pH值，在pH值为5、6、7、8和9的肉汤中培养赖氨酸细菌。培养物在最适温度下培养24小时。使用波长为620nm的分光光度计测量分离物的生长，每次处理重复3次。

细菌生长曲线的测定

在24小时龄时，无菌培养一株优良细菌分离株（分离株在含有10 ppm HgCl的NA培养基上复壮）₂)接种于锥形烧瓶中100ml NB培养基中，在室温旋转摇床(100rpm)上培养。24小时培养物用生理盐水冲洗，取5ml接种于45ml NB培养基中，10 pp mHgCl2，室温旋转摇床(100转/分)孵育。在620 nm波长下测定悬浮培养的吸光度值。吸光度测量从0小时到72小时，间隔4小时。然后将得到的吸光度数据转换成生长曲线。x轴是时间y轴是吸光度。将生长曲线与不含HgCl的NB培养基中细菌的生长曲线进行比较₂．

汞线减速的粘液性试验

在这个测试阶段，细菌分离株在NB培养基中250 ml erlenmeyer中培养24小时，然后用生理盐水冲洗分离细胞，用分光光度计在620 nm波长处测量吸光度。取0.1 ml吸光度值为2的培养物，在50ml含100ppm HgCl的NB培养基中培养₂然后在顶部振荡器（100rpm）上孵育7天。此外，通过使用尺寸为0.2μm的膜过滤器将细菌细胞与培养基分离。通过冷蒸气Nb原子吸收分光光度计（CV-AAS）测量培养基中剩余的Hg浓度。此外，含有100ppm的HgCl的Nb培养基₂以不接种抗汞细菌为阳性对照，以不含HgCl的NB培养基为阴性对照₂以耐汞菌为阴性对照。CV-AAS工作原理是将二氧化汞化合物转化为汞离子，汞离子随后还原为金属汞，并在253.7 nm波长下分析其冷蒸汽原子吸收。所用试剂为SnCl2还原剂、H2SO4 + HCl酸溶液(Rondonuwu, 2011)。为了确定汞的去除效率水平，使用了这个公式



鉴于：C1=第一浓度（ppm）；C2=最终浓度（ppm）；Eff=效率

数据分析

对数据进行定性和定量分析。定性是通过描述表征和抗汞细菌分离株的识别的结果能够减少汞。定量地，于pH值测试和生长曲线测定通过吸光度测量细菌细胞的数量来完成。获得以条形图的形式被做了数据，但是在使用Microsoft Excel程序的线图形式的生长曲线。

结果和讨论

两株耐汞细菌能在含500 ppm HgCl的NA培养基中存活₂加工时发现金箔沉淀物样品。分离株为L.10bandL.10c。经过鉴定，这些分离株被鉴定为芽孢杆菌去哪里航空运气润肤科. 图3和图4显示了分离物的宏观和微观形态，表1显示了每个分离物的特征。

芽孢杆菌sp在日本和印度被发现是一种抗汞细菌。⁷此外芽孢杆菌在印度尼西亚的Tondano河中也发现了sp。⁸蜡样芽胞杆菌和Bacillussubtilis在卡利马斯河发现的泗水也抗汞。⁹芽孢杆菌相比之下，Spis更常被发现是抗汞细菌Aeromonashydrophila.．航空运气润肤科已在受西爪哇HginBandung污染的金矿沉积物中发现，可在550mg/LHgCl下生长_2.^10.此外，一些菌株A.hydrophila在突尼斯被重金属污染的海水、鱼类和废水中发现。^11.温度是影响细菌生长的环境因素之一。芽孢杆菌sp.在25℃时吸光度值最高（0.216），在45℃时吸光度值最低（0.118）。气单胞菌属hydropila在37ËšC的吸光度值很高(0.404)，在45ËšC的温度下吸光度值最低(0.224)(图5)。温度对细菌生长的影响是因为温度影响代谢中酶的活性。温度影响细菌生长过程中的化学反应、生长速度和微生物的生长总量。^12.虽然不同细菌的吸光度值都属于中嗜菌。中温细菌是一组可以在20-45ËšC温度下生长的细菌。^13.

细菌生长会受到各种环境因素的影响，其中一个因素是培养基的pH值。培养基的酸度影响培养基的生长芽孢杆菌sp和A.水生门．芽孢杆菌sp在pH为6时生长最优，吸光度为0.106，且吸光度随培养基pH的增加而降低(图6)。

与…对比芽孢杆菌服务提供商，A.嗜水肺pH 7时的吸光度值最高(0.192)，pH 5时的吸光度值最低(0.11)(图6)。酸度影响细菌的生长，因为pH影响细菌代谢中的酶。如果pH值不适当，酶的活性就会降低，这是因为酶在适当的电离状态下是有活性的。不同酶的适当电离条件也不同，但一般在pH 6-8范围内。^14.可以将酶变性由于pH的变化。酶工作在中性pH，并且当环境变得非常酸性或强碱性会变得无效。^15.根据在那个pH范围内的生长能力，芽孢杆菌sp,A.嗜水肺可以分为中性粒细胞细菌。中性粒细胞是一种细菌组能够在pH 6-8处生长。^14、15的增长芽孢杆菌sp和气单胞菌属hydrophila在含10ppm HgCl的NB培养基中₂并培养3天还没有达到稳定期。得到的结果与对照不同芽孢杆菌SP，其中在第37届达到静止期和A.嗜水肺这在第68小时的第44小时和死亡阶段达到了固定阶段（图7）。在与含有10ppm hgcl的培养基孵育期间₂在美国，这两种细菌都只能达到指数阶段。芽孢杆菌Sp在68和达到指数阶段A.嗜水肺第48小时（图7）。这是因为适应阶段足够长。这是由于HgCl₂在medium.In适应阶段的新酶的合成发生时，根据所述媒体和没有发现细胞数的增加。^14.在含HgCl的培养基中适应阶段的长度₂存在于细菌中OchrobactrumSP S79和L6T2分离物，其中这些细菌的第二静止阶段在孵育时间的第4天至第9天发生。^16.

嗜水气单胞菌和芽孢杆菌špresistantandable减少为100ppm的汞含量，以1.67ppm为A.hydro PHILA和1.33 ppm的芽孢杆菌s pafterincated 7天。汞含量的结果依赖于培养基，用于确定减少汞的含量的效率。芽孢杆菌可将汞减少98.7%，其中A.水母为98.33%(表2)芽孢杆菌去哪里A.hydrophila降低与抗汞特性相关的汞含量。细菌对汞的抗性是由于mer操纵子包含于质粒。^4，5

Mer的操纵子由各种各样mergenes的。每个bacteriumhasits自己在mergene变化默尔操纵子。^3.但细菌耐药机制对无机汞而异的不同细菌种类。这是由于HG的汞的减少²⁺对Hg⁰诱导由编码汞离子reducta看出zymeenmer操纵子基因MerA。²汞离子还原酶与汞形成键²⁺通过从NADPH键入NADP的粘合剂中的电子通过Flav转移，因此形成了减少，因此形成了降低的Hg，Iehg⁰．⁵汞的减少²⁺对Hg⁰去除氧化汞和减少溶解在介质中的汞。^17.已知芽孢杆菌属的一些细菌具有基因变异meroperon．Bacillusmegaterium和Bacillusmacroides.广谱抗汞细菌在哪里蜡样芽胞杆菌和Bacilluslicheniformis是一种抗汞细菌。^18.只有汞还原体蛋白（MerA）的细菌被称为窄谱抗汞细菌，而广谱抗汞细菌则是以汞还原物（MerA）和蛋白质组织酶（MerB）为载体的细菌。MerB的功能是催化汞碳键的终止，以盐硫醇的形式生成有机化合物和离子汞。^20.芽孢杆菌年代pandA.嗜水肺在这项研究中发现，还不知道在减少汞中所拥有的光谱范围。到目前为止还没有关于mergene由拥有变化气单胞菌属hydrophila．然而，空气单胞菌属的其他物种是已知的变异mer操纵子基因。Aeromonassalmonicida.h是一些Mer.基因的mer操纵子，即我，mer p，merr，mere，mert，merd和merb。^19.水气单胞菌PHILA能够改变电池的形状，在汞暴露后从杆状变成圆形。^11.

承认

作者想对Magister生物科学和印尼巴厘岛Udayana大学的负责人表示感谢，感谢他们对这项研究的支持。我们也感谢印尼马鲁库省省长对开展这项研究工作的支持。

参考