当前世界环境

介绍

在世界范围内，水产养殖正在迅速发展，在许多国家，鱼类是动物蛋白的主要来源。人口的开发与工业的发展。我们的生态系统已经被严重污染，对鱼类和其他水生动物造成了相当大的压力。

水产养殖系统疾病暴发的发生可归结为多种原因。对宿主、病原体和环境之间错综复杂的平衡缺乏了解是最明显的。这些条件使微生物更容易感染。由此产生的信息构成了研制疫苗的基线。Ogbulie(1998)研究了化疗药物对养殖鱼类弧菌病的控制效果。抗生素经常被用于但始终存在细菌产生耐药性和产品残留的风险(Fjalestad)et al .,1993)。

鱼类病原体耐药性的发展经常被报道(Aoki, 1992)。病毒病一直是一个主要原因，特别是在微咸水和海洋养殖系统。创伤弧菌是海洋和微咸水中的鱼类病原体之一(Thampuran等, 1998)。第一次尝试接种疫苗是Hayashi提供的et al .,(1964)为预防弧菌。Collado等．(2000)研究了不同疫苗对弧菌病的防治效果创伤弧菌生物类型2在欧洲鳗鲡。市面上有预防弧菌病的疫苗。各种研究表明，已对几种物质进行了预防细菌疾病的试验，包括全细胞细菌(Fukuds和Kusuda, 1981年)、减毒活疫苗(Kusuda和Hamaguchi, 1988年)、脂多糖提取物(Fukuda and Kusuda, 1982;1985)。脂质体疫苗(久须田et al .,富毒全细胞疫苗(Magarinoset al .,1994年)，尽管在实验室试验中有效，但它们在水产养殖场并不十分有效。

在本研究中Mugil领着对弧菌隔离和顺向对几种抗体滴度进行分析。

材料和方法

实验动物的收集和维护

青鱼幼鱼(6-10厘米)(Mugil领着， Mugilidae)穆图卡杜、汽巴、金奈城内及周围的水体。它们被保存在容量为500升的大型玻璃钢罐中。在研究期间，水的理化参数、温度范围为27°±27.5°、pH值为7.4±7.4均保持正常。

孤立的细菌

这种细菌是从自然感染的鱼类中分离出来的。对受感染的濒死鱼进行鉴定，无菌取样进行细菌培养。将采集的血液、肾组织等标本接种于佐贝尔海洋琼脂、碱性蛋白胨水、TCBS琼脂等培养基中。进一步鉴定性状采用伯吉确定细菌学方法。

制备的疫苗

福尔马林灭活细菌弧菌本文描述采用标准方法制备。Lillehang(1989)，接种碱性蛋白胨水培养，10000 rpm离心15分钟，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次。最后的颗粒在PBS中重悬至10⁹CFU /毫升。用标准板法计算细胞密度。将菌悬液连续稀释至10^－7-10年⁹CFU /毫升。用0.5%福尔马林灭活悬浮液24小时。如前所述，用离心法收集失活的悬浮液。

免疫的鱼

鱼被维持在两组，即每一稀释倍数(10^－6, 10^7,10⁸CFU/ml)，以评估不同剂量的细菌初次和加强应用的效果。创伤弧菌疫苗采用肌肉内注射的方式注射。免疫时，每稀释液取36尾鱼，每组约18尾鱼，共3个重复，即分别肌肉注射引物(6x3)、增强剂(6x3)各稀释液菌悬液0.1 ml。对照组每尾鱼肌注0.1 ml无菌PBS。在整个实验期间，每天更换水。分别于注射后0天、7天、14天和20天取样进行血清抗体分析。增效组鱼给予21 dpi的增效剂量，含等量的菌悬液。

凝集滴定度

每隔7天，从零dpi开始，选取10条鱼。血液样本Mugil领着通过尾静脉收集麻醉(苯坐卡因10 ppm)。血液凝固后在4°c的温度下保存过夜。血清6000 rpm离心10分钟，50°灭活30分钟。

在96孔' U '底微滴定板(Tarson India Ltd.)的每孔中加入无菌PBS (pH 7.2) (50ml)。1^圣在井中加入100 ml灭活血清。从1^圣将50ml灭活血清转移至2^nd好。这种连续的稀释持续到11^th好。最后一口无血清井作为阴性对照。后来,灭活创伤弧菌暂停(10⁸每孔加CFU/ml (50ml)，室温4℃过夜1小时。最后稀释的血清显示明确的凝集被作为终点来估计滴定度。每个鱼样本的凝集滴度用对数表示²基于视觉观察的值(Sundick和Rose, 1980)。

统计分析

在snede和Cochram(1968)之后，对血清凝集滴度进行方差分析。

这用于评估应用的有效性，以评估特异性免疫记忆(Nosal等．1965)。第一次反应时相应时刻的滴定度。这个公式是,

Mf = s (x) -s (o) / p (x)

在哪里
增强剂组在增强剂后第X天S (X)滴度
S (O) -滴度
P (X) -启动组在增强剂后第X天的滴度。

结果与讨论

自然感染的雏鸟Mugil领着是迟钝和坏死的性质。大多数感染的鱼有出血性斑点、体表疖、发黑。所有原代培养基都产生相应的菌落形态。生物化学反应证实该物种为创伤弧菌．

表1和表3显示了初级和增强免疫反应Mugil领福尔马林处理创伤弧菌．启动组注射10⁸21 dpp时CFU/ ml为7.6±0.55(抗体滴度)。在14天内急剧上升，高剂量稳定。21天后，初效降至(5.4±0.55)。在增强免疫反应中，较高的抗体滴度(35 dpb)为11.6±0.55。

表2和表4为方差分析计算的统计分析。方差分析测试剂量之间的差异和几天后启动助推器显示高度显著的差异组。统计分析显示，在初级和强化反应的剂量和持续时间之间有显著差异(P >0.05)Mugil领对intra-muscularlly注入创伤弧菌．

结果显示对注射有明显的进行性阳性反应。结果表明，注射法、福尔马林处理的抗原在21 dpp上滴度较高，二级反应在35 dpb上滴度较高。然而，在高剂量时，14天后的反应达到峰值并稳定下来。挂et al。(1997)证明了佐剂和加强注射对鳗鱼产生抗体的影响。加强注射引起更高的抗体滴度。本研究还表明，二抗反应水平与一次剂量呈正相关。通常助推器反应在I后较早的一天达到一个较高的峰值^圣注入。

表1:免疫Mugil领与福尔马林灭活创伤弧菌(主剂)

启动后*天

表5显示了不同稀释度下的记忆因子结果。实验计算的记忆因子用于评价增强剂应用的效果和评价特异性免疫记忆。MF结果与抗体反应结果基本一致。记忆因子最高，为0.88Mugil领注射10^－7CFU/鱼21 dpb。

表2:用于检验启动反应的剂量和持续时间之间差异的显著性的方差分析m .领对腹腔内注射创伤弧菌