利用从淡水双壳类中分离的p53蛋白或其同源物作为污染标记
Madhav V. Upadhye.1*，Sonal M. Manohar1和Ujwala Jadhav1
1孟买大学生命科学系，孟买，400 098印度。
http://dx.doi.org/10.12944/cwe.5.1.32
P53是一种肿瘤抑制基因，是细胞周期控制和细胞凋亡的基础。双疟原虫Corrugata是印度次大陆淡水生态系统的重要组成部分。在本研究中，试图检查P53蛋白和其与过滤器贻贝中提取和分离的同源物;可以用作污染标记。
Parreysia Corrugata;p53;西方墨点法;水污染
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利用从淡水双壳类中分离的p53蛋白及其同源物作为污染标志物。Curr World Environ 2010; 5（1）：189-192 Doi：http://dx.doi.org/10.12944/cwe.5.1.32
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利用从淡水双壳类中分离的p53蛋白及其同源物作为污染标志物。中国环境科学(英文版);5(1):189-192。可以从://www.a-i-l-s-a.com/?p=1148.
介绍
双偏见贻贝是许多水生社区的重要生态，经济和文化组成部分。作为过滤器，它们将能量转移到更高的营养水平，并用作水质和污染物的监察。1
P53蛋白是P53基因的产物，其是一种肿瘤抑制基因，即细胞周期控制和细胞凋亡。P53中的栖息地污染诱导突变已被证明在软壳蛤蜊中引起白血病Mya arenaria.居住在污染的水中。这导致迹象表明P53蛋白及其同源物也可用作污染标记物。
本研究对双壳类软体动物组织中p53蛋白及其同源物的存在进行了研究Parreysia Corrumata.收集自马哈拉施特拉邦的两个水体。将所得结果与湖沼调查结果进行比较，以验证这些相对较新的蛋白质标记作为污染标记的有效性。
材料和方法
样本的集合
淡水双向莫尔斯库斯帕雷西亚Corrumata.收集来自Vaitarana River的生活在南德市附近的塔纳区和戈达瓦里河。根据APHA的描述，还采集了这些双壳贻贝所在区域的水样进行物理化学分析。2将水样和活贻贝带到生命科学系，孟买大学生物技术实验室，并在收集的24小时内加工。
组织提取液的制备
P. Corrugata.被清洗、打开和仔细解剖内器官。用磷酸盐缓冲盐冲洗组织，并通过在4℃下均化500mg组织均化500mg组织萃取蛋白质，在4°C避免蛋白水解。将混合物在4,000rpm下离心40.C 30分钟;上清液立即回收使用或保存在- 40°c直到进一步使用。通过Folin Lowry方法测定蛋白质浓度3.以BSA为标准。
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表1:Thane和nand水样的理化分析
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Western Blotting.
Western blot分析是否有与小鼠抗p53单克隆抗体反应的软体动物组织中p53蛋白的变异。分析的组织有足部、鳃、地幔和内收肌。使用Mini-trans - blot电泳转移细胞(BIO-RAD)将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶电转移到PVDF膜(Immobilon-P, Millipore，美国)，在400 mA/ 2 h，使用磷酸盐转移缓冲液/含20%甲醇的三甘氨酸缓冲液。阻塞1 h后在室温20毫米Tris-HCl组成的解决方案,(pH值7.4),125毫米氯化钠,Tween-20 0.1%, 5%脱脂奶粉,immunodetection是由探测与小鼠单克隆anti-p53(5813页,σ)特定抗体的稀释1:200一夜之间在4°C.使用抗β-肌动蛋白单克隆抗体(Sigma)，稀释1:20 000，以确定相同的负载。将HRP偶联抗小鼠抗体(Santa Cruz Biotech, USA)在室温下稀释1。5000.蛋白质检测通过化学发光（ECL，Sigma）进行。
结果与讨论
印度河流和其他水生生态系统的污染监测通常是通过分析各种理化和微生物参数进行的。莫汉蒂4.进行试验研究以研究p53的存在淡水二气子组织中的蛋白质或其同源物l . corrianus从恒河的三个采样点，即坎普尔、阿拉哈巴德和瓦拉纳西采集。4.在SDS-PAGE之后，在免疫印迹分析中，MOLLUSCAN组织中的单克隆抗P53抗体识别45kDA蛋白（P45）。作者得出结论，软体动物P45是p53-均胶种，或p53样蛋白可以使用生物标志物进行污染监测。
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板1：用于不同组织的Nanded样本的免疫印迹，用于污染的P. Corrugata的不同组织
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在本研究中，我们检测了取自四种不同组织的p53蛋白或其同源物的表达P. Corrugata.收集自Thane和nand，并进行了物理化学分析。分析表明，nand的样品污染严重，而Thane的样品相对较好(表1)。
使用Folin Lowry方法估计总提取的蛋白质显示出良好的蛋白质产率。观察到Gonads具有最高的蛋白质浓度，而在披风组织中可以看到最少的含量。这是为了从所有四种组织负载等量的蛋白质，以比较p53和/或其同源物的组织特异性表达。
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板2：P. Corugata不同组织的免疫印迹，表明缺乏水污染
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使用抗P53单克隆抗体的Western印迹分析，用于从差别和所列表明的矛盾结果中收集的样品。除了P53蛋白外，还发现45kDa蛋白（P45）被来自来自Nanded（板1）收集的研究动物的所有四组织中的抗P53抗体识别。然而， 从多于毕因收集的所有四种组织的免疫斑分析未表现出p45变体蛋白的存在，但发现53kDa蛋白（p53）在所有四种组织中表达（板2）。
因此，从目前的调查可以得出结论，如莫汉蒂所报告的， 4. P45或P53如蛋白质在从从污染的位点收集的双唾液贻贝组织中表达，而不是在从未污染的部位收集的分枝贻贝组织中（或没有任何水污染）的偶然贻贝组织。由于来自所在的水样也被发现受到严重污染的，P53的P45变体的表达已经用作污染标记物。更多这些淡水研究 有必要确认贻贝群体的栖息地确认这些观察。
P53是分子肿瘤中最强烈的研究基因，因为它具有充当肿瘤抑制剂的能力。一些P53-同源物可以激活P53-响应基因，例如P21，通过在培养细胞中诱导细胞凋亡来抑制细胞生长， 5. 介绍凋亡以响应DNA损伤 6. 并促进甲状腺癌的恶化。 7. 在双壳类动物中，这样的研究是缺乏的。因此，有必要对p45蛋白在淡水双壳类软体动物中的作用进行进一步的结构和功能分析。
参考
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6.Jost c.a, Marin M. C. and Kaelin W. G.，自然，（1997）389：191-194。
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